人皮膚T細胞虜獲趨化因子(CTACK/CCL27)ELISA試劑盒

本試劑盒僅供研究使用。

檢測范圍：1pg/ml-40pg/ml

使用目的：本試劑盒用于測定人血清,血漿相關液體樣本中人皮膚T細胞虜獲趨化因子(CTACK/CCL27)含量。

實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人皮膚T細胞虜獲趨化因子(CTACK/CCL27)水平。用純化的人皮膚T細胞虜獲趨化因子(CTACK/CCL27)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入人皮膚T細胞虜獲趨化因子(CTACK/CCL27），再與HRP標記的人皮膚T細胞虜獲趨化因子(CTACK/CCL27)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人皮膚T細胞虜獲趨化因子(CTACK/CCL27)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人皮膚T細胞虜獲趨化因子(CTACK/CCL27)濃度。

試劑盒組成
1    30倍濃縮洗滌液    20ml×1瓶    7    終止液    6ml×1瓶
2    酶標試劑    6ml×1瓶    8    標準品（80pg/ml）    0.5ml×1瓶
3    酶標包被板    12孔×8條    9    標準品稀釋液    1.5ml×1瓶
4    樣品稀釋液    6ml×1瓶    10    說明書    1份
5    顯色劑A液    6ml×1瓶    11    封板膜    2張
6    顯色劑B液    6ml×1/瓶    12    密封袋    1個

標本要求
1.血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
2.血漿：應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成應再次離心。
3.尿液：用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
4.細胞培養上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。
5.培養細胞:檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
6.組織標本:切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑,用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
7．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
8．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟
標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
40pg/ml    5號標準品    150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
20pg/ml    4號標準品    150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
10pg/ml    3號標準品    150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
5pg/ml    2號標準品    150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
2.5pg/ml    1號標準品    150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7.溫育：操作同3。
8.洗滌：操作同5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11.測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

計算
以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。

注意事項
1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。
請每次測定的同時做標準曲線，最好做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數（×n×5）。
封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。

保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個月