人H-ras ELISA Kit實(shí)驗(yàn)原理
2024-03-08 11:34 作者:洛辰 來(lái)源:上海遠(yuǎn)慕生物試劑
人H-ras ELISA Kit用途
該試劑盒采用“一步”夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)體外定量檢測(cè)血清、血漿、組織、細(xì)胞或其他相關(guān)生物液體中H-ras濃度。
檢測(cè)原理
將目標(biāo)抗體包被于96孔微孔板中,制成固相載體,向微孔中分別加入標(biāo)準(zhǔn)品或標(biāo)本,其中的目標(biāo)連接于固相載體上的抗體結(jié)合,然后加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗體,將未結(jié)合的抗體洗凈后再次徹底洗滌后加入TMB底物顯色。TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的目標(biāo)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(O.D.值),計(jì)算樣品濃度。
反應(yīng)類(lèi)型 雙抗夾心法
規(guī)格 96T/48T
中文名稱(chēng) 人H-ras ELISA試劑盒
反應(yīng)時(shí)間 1.5 h
檢測(cè)方法 酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定
檢測(cè)范圍 0.25 ng/mL – 8 ng/mL
靈敏度 0.1 ng/ml
上樣體積 50 μL/孔
樣本類(lèi)型 血清、血漿、組織、細(xì)胞上清或其他生物樣本
特異性
可檢測(cè)樣本中的H-ras , 且與其它類(lèi)似物無(wú)明顯交叉反應(yīng)。
重復(fù)性
板內(nèi),板間變異系數(shù)均<10%。
批內(nèi)差
取同批次試劑盒對(duì)低、中、高值定值樣本進(jìn)行定量檢測(cè),每份樣本連續(xù)測(cè)定20次,分別計(jì)算不同濃度樣本的平均值及SD值。
批間差
選取3個(gè)不同批次的試劑盒分別對(duì)低、中、高值定值樣本定量測(cè)定,每個(gè)樣本使用同一試劑盒重復(fù)測(cè)定8次,分別計(jì)算不同濃度樣本的平均值及SD值
精密度
精密度用樣品測(cè)定值的變異系數(shù)CV表示。CV(%)=SD/mean×100 CV<10% Inter-批間差: CV<13%
穩(wěn)定性
經(jīng)測(cè)定,試劑盒在有效期內(nèi)按推薦溫度保存,其活性降低率小于5%。
為減小外部因素對(duì)試劑盒破壞前后檢測(cè)值的影響,實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境條件需盡量保持一致,尤其是實(shí)驗(yàn)室內(nèi)溫度、濕度及溫育條件。其次由同一實(shí)驗(yàn)員來(lái)進(jìn)行操作可減少人為誤差。
試劑盒的組成
▲未開(kāi)封試劑盒,4℃保存;已開(kāi)封,標(biāo)準(zhǔn)品-20℃保存,酶標(biāo)板加干燥劑后密封-20℃保存,其他4℃保存。
英文名稱(chēng) 中文名稱(chēng) 規(guī)格 規(guī)格
Microe isa stripplate 包被微孔板 96T 48T
Standard 標(biāo)準(zhǔn)品 0.3ml/管*6 0.3ml/管*6
HRP-Corjugate HRP標(biāo)記抗體 10mL 5mL
Sample Diluent 樣本稀釋液 6mL 3mL
Chromogen SolutionA 底物液A 6mL 3mL
Chromogen SolutionB 底物液B 6mL 3mL
Stop Solution 終止液 6mL 3mL
20× Wash Solution 20×濃縮洗滌液 25mL 15mL
Product Description 說(shuō)明書(shū) 1份 1份
Sealing film 封板膜 2張 2張
實(shí)驗(yàn)所需自備物品
1、450±10nm濾光片酶標(biāo)儀(建議儀器使用前預(yù)熱)
2、高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL.
3、Eppendorf 移液器.
4、蒸餾水或去離子水.
5、脫脂棉吸水紙.
6、37℃恒溫箱.
7、100ml和1000ml量筒.