人副腫瘤性天皰瘡抗體(PNP)ELISA試劑盒僅供研究使用。   
 
使用目的:
本試劑盒用于測定樣本中副性天皰瘡抗體PNP-Ab的含量。

實驗原理
本試劑盒應用酶聯免疫競爭法測定標本中副性天皰瘡抗體PNP-Ab水平。用純化的副性天皰瘡抗體PNP-Ab抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中加入副性天皰瘡抗體PNP-Ab,和HRP標記的副性天皰瘡抗體PNP-Ab抗原,使它們競爭結合,經過洗滌后加底物TMB顯色。樣本顏色的深淺和樣品中的副性天皰瘡抗體PNP-Ab的含量呈負相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中副性天皰瘡抗體PNP-Ab的含量。   

試劑盒組成

1	30倍濃縮洗滌液	20ml×1瓶	8	標準品S1(800ng/L)	0.5ml×1瓶
2	酶標試劑	6ml×1瓶		標準品S2(400ng/L)	0.5ml×1瓶
3	酶標包被板	12孔×8條		標準品S3(200ng/L)	0.5ml×1瓶
4	顯色劑A液	6ml×1瓶		標準品S4(100ng/L )	0.5ml×1瓶
5	顯色劑B液	6ml×1瓶		標準品S5(50ng/L)	0.5ml×1瓶
6	終止液	6ml×1/瓶	9	說明書	1份
7	樣品稀釋液	6ml×1/瓶	10	封板膜	2張

 
樣品收集、處理及保存方法
1.  血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2.  血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。
3.  細胞上清液：3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4.  組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。
5.  保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充  分解凍。

樣本要求
1．樣本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟
1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照隨貨說明書中圖表在小試管中進行稀釋。
2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7.溫育：操作同3。
8.洗滌：操作同5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.
10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11.測定：以空白孔調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

計算
以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。

注意事項
1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。
4．請每次測定的同時做標準曲線，最好做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。

規格: 96T份/盒
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:2-8℃。
2.有效期:6個月