本試劑僅供研究使用

產品名稱:人抗紅細胞抗體(RBC)Elisa試劑盒
產品規格:48T/96T

實驗原理
TPO-Ab試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗（ELISA）.已知TPO-Ab濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將TPO-Ab物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A、B，和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中TPO-Ab的活性濃度呈比例關系。

試劑盒內容及其配制
試劑盒成份（2-8℃保存）    96孔配置    48孔配置    配制
96/48份酶標板    1塊板（96T）    半塊板（48T）    即用型
塑料膜板蓋    1塊    半塊    即用型
標準品：400ng/ml    1瓶（0.6ml）    1瓶（0.3ml）    按說明書進行稀稀
空白對照    1瓶（1.0ml）    1瓶（0.5ml）    即用型
標準品稀釋緩沖液    1瓶（5ml）    1瓶（2.5ml）    即用型
生物素標記的TPO-Ab抗體    1瓶（6ml）    1瓶（3.0ml）    即用型
親和鏈酶素-HRP    1瓶（10ml）    1瓶（5.0ml）    即用型
洗滌緩沖液    1瓶（20ml）    1瓶（10ml）    按說明書進行稀釋
底物A    1瓶（6.0ml）    1瓶（3.0ml）    即用型
底物B    1瓶（6.0ml）    1瓶（3.0ml）    即用型
終止液    1瓶（6.0ml）    1瓶（3.0ml）    即用型

自備材料
1．  蒸餾水。
2．  加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
3．  振蕩器及磁力攪拌器等。

安全性
1．  避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。
2．  實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3．  不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
 
操作注意事項
1．  試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。
2．  實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。
3．  不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
4．  使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
5．  使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6．  洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
7．  底物A應揮發，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
8．  加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
9．  按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
 
標本要求
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟
1． 使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產生加樣上的誤差。
2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11. 測定:以空白孔調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

注意事項
1、每個樣本量收集體積=100ulx檢測種類,如果要做復孔,標本量收集體積=100ulx檢測種類x2
2、樣本收集后若在一周內進行檢測可保存于2-8°C,若不及時檢測,請進行分裝,凍存于-20°或-80°C,避免反復凍融
3、試劑盒的檢測范圍不等同于樣本中待測物的濃度范圍,建議實驗前通過相關文獻預估樣本中待測物的濃度并通過預實驗確定樣本。
4、血清標本采集是應注意避免溶血,紅細胞溶解是會釋放出具有過氧化物酶活性的物質,溶血標本可能會增加非特異性顯色
5、為了保證尿液檢測的準確性,必須正確收集尿液標本和保存,收集尿液的容器必須要清潔干燥, 使用一次性的容器,避免因用藥并清潔不到而造成的污染,尿液樣本必須新鮮,留取后,應及時檢測或保存
6、標本宜在新鮮是檢測如有細菌污染,菌體中可能含有內源性HRP,也會產生假陽性反應。如在冰箱中保存過久,其中可能發生聚合,間接法ELISA中樂視本底加深,
7、反復凍融會使蛋白效價降低,所以待測樣本如需多次檢測,宜少量分裝凍存。

計算
以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。

儲存有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6個月