菌落總數平板計數原則：

1、無菌操作：操作中必須有“無菌操作”的概念，所用玻璃器皿必須是完全滅菌的，不得殘留有細菌或抑菌物質。所用剪刀、鑷子等器具也必須進行消毒處理。樣品如果有包裝，應用75%乙醇在包裝開口處擦拭后取樣。

操作應當在超凈工作臺或經過消毒處理的無菌室進行。瓊脂平板在工作臺暴露15分鐘，每個平板不得超過15個菌落。

2、采樣的代表性：如系固體樣品，取樣時不應集中一點，宜多采幾個部位。固體樣品必須經過均質或研磨，液體樣品須經過振搖，以獲得均勻稀釋液。

3、樣品稀釋誤差：為減少樣品稀釋誤差，在連續遞次稀釋時，每一稀釋液應充分振搖，使其均勻，同時每一稀釋度應更換一支吸管。

在進行連續稀釋時，應將吸管內液體沿管壁流入，勿使吸管尖端伸入稀釋液內，以免吸管外部粘附的檢液溶于其內。

為減少稀釋誤差，SN標準采用取10mL稀釋液，注入90mL緩沖液中。

菌落平板計數準確性關鍵

一、平板劃線分離法由接種環以菌操作沾取少許待分離的材料，在無菌平板表面進行平行劃線、扇形劃線或其他形式的連續劃線，微生物細胞數量將隨著劃線次數的增加而減少，并逐步分散開來，如果劃線適宜的話，微生物能一一分散，經培養后，可在平板表面得到單菌落。

二、稀釋倒平板法先將待分離的材料用無菌水作一系列的稀釋（如一∶一0、一∶一00、一∶一000、一∶一0000…），然后分別取不同稀釋液少許，與已溶化并冷卻至四5℃左右的瓊脂培養基混合，搖勻后，傾入滅過菌的培養皿中，待瓊脂凝固后，制成可能含菌的瓊脂平板，保溫培養一定時間即可出出菌落。如果稀釋得當，在平板表面或瓊脂培養基中就可出現分散的單個菌落，這個菌落可能就是由一個細菌細胞繁殖形成的。隨后挑取該單個菌落，或重復以上操作數次，便可得到純培養。

稀釋涂布法：優點：可以計數，可以觀察菌落特征。缺點：吸收量較少，較麻煩，平板不干燥效果不好，容易蔓延。一般用于平板培養基的回收率計數！！

稀釋混合平板法：優點：可以計數，吸收量為一ml，較方便。優點：不能觀察菌落特征。一般用于菌落總數的計數！！平板劃線法：優點：可以觀察菌落特征，對混合菌進行分離！！缺點：不能計