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真核生物異檸檬酸脫氫酶研究新進展

2019-03-26 10:07 作者:洛辰 來源:上海遠慕生物試劑

IDH是一類廣泛存在于生物體中的酶家族,該酶以NADP或NAD為輔酶催化異檸檬酸氧化脫羧生成a-酮戊二酸。真核生物具有NADP和NAD依賴型的兩種IDH,其中NADP-IDH存在于細胞漿、線粒體和過氧化物酶體中,被發現主要在細胞抗氧化損傷、活性氧自由基的解毒以及脂肪和膽固醇合成中起重要作用;而NAD-IDH存在于線粒體內,被認為是三羧酸循環的限速酶。

丁建平研究組長期從事真核生物異檸檬酸脫氫酶的結構和功能研究,先后測定了人胞漿NADP-IDH和酵母線粒體NADP-IDH與輔酶、底物、金屬離子和產物等復合物的晶體結構,并開展了生化和功能研究,揭示了NADP-IDH發揮生物學功能及其導致疾病發生的分子基礎。

哺乳動物NAD-IDH是由a、b和g三種亞基以2:1:1的比例組裝而成,其中a亞基是催化亞基,參與底物、輔因子、金屬離子的結合,而b和g亞基被認為是調節亞基,可能具有結合調節因子的能力。前期他人研究工作發現,哺乳動物NAD-IDH可以受到檸檬酸CIT、ADP等因子的別構調節,從而改變自身對底物異檸檬酸ICT的親和力,但不影響最大反應速率。a和b亞基或者a和g亞基可以形成基本的結構單元、并分別具有一定的活力,ab和ag異元二聚體組裝成八聚體全酶發揮功能,但是b和g兩種調節亞基在結構和功能上的差異,以及它們進行別構調節的機制還不清楚。

丁建平研究組的助理研究員馬騰飛等人系統地研究了人源NAD-IDH全酶以及ab和ag異元二聚體受調節因子激活前后的酶學性質。生化數據表明,ab和ag異元二聚體均具有催化活力,但是表現出不同的酶學性質。ag異元二聚體體現出與全酶相似的酶動力學參數,可以受到CIT和ADP的別構調節,并且可以受到低濃度ATP的激活及高濃度ATP的抑制。與之不同,ab異元二聚體不能被CIT和ADP別構調節,并且只能受到ATP的抑制。

通過突變體的實驗研究人員還發現,在受調節因子激活前后,ab和ag異元二聚體對全酶酶活力的貢獻是相當的,并且都可以通過g亞基而非b亞基受到CIT和ADP的別構調節。這些研究結果首次闡明了b和g調節亞基在功能上的差異,即在人源NAD-IDH全酶中g亞基發揮調節功能,而b亞基主要在全酶組裝中發揮結構功能。

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