無菌無毒的操作環境和培養環境是保證細胞在體外培養成功的首要條件。在體外培養的細胞由于缺乏對微生物和有毒物的防御能力，一旦被微生物或有毒物質污染，或者自身代謝物質積累，可導致細胞中毒死亡。因此，在體外培養細胞時，必須保持細胞生存環境無菌無毒，及時清除細胞代謝產物。
(1)恒定的細胞生長溫度：37℃.(維持培養細胞旺盛生長，必須有恒定適宜的溫度。)

(2)ph ：7.0-7.4 .(過酸或過堿可導致細胞死亡。這主要與蛋白質的變性和細胞膜的結構受損有關。)

(3)滲透壓 ：細胞內外可溶于水的物質比例和種類決定細胞的膨脹與收縮程度，因為細胞膜是半透膜，只允許對自己有利的物質通過。同一物質在細胞內外的分布的數量不同，當某一種極溶于水的物質在細胞外濃度過大時，有可能導致細胞干癟死亡，這些物質在細胞內過多時導致細胞過量吸水膨脹。細胞膜調節滲透壓的能力是有限的。

(4)營養物 ：營養物和水一起，又叫細胞培養液，培養液中含有細胞增殖和生長所需要的各種物質。營養物包括：n 源、c源，這些物質與提供能量有關；無機鹽、維生素、激素，這些物質與代謝調節控制有關。細胞培養液的設計一直是細胞離體培養技術的關鍵。理想的細胞培養液可以同時解決細胞離體培養所需要的ph、滲透壓、營養物、調節物質的全部需要。

(5)水 ：需要經過滅菌鍋滅菌才能放入培養箱水槽

(6)無菌條件 ：與實驗室的硬件設備和個人操作有很大關系。

(7)合適的氣體環境：氣體是哺乳動物細胞培養生存必需條件之一，所需氣體主要有氧氣和二氧化碳。動物細胞需要不斷供給氧氣和排除二氧化碳，植物細胞與此相反。