抗體制備是免疫學研究的基礎。制備一個合適的抗體將會決定著免疫實驗的成敗。抗體制備過程涉及到很多個方面，比如免疫原如何設計、免疫過程的優化、目的抗體篩選、抗體純化、應用鑒定等。接下來我們將會對一些關鍵的技術難點進行解答。

1. 免疫原是如何設計的？有什么原則？
解答：免疫原可以是天然蛋白也可以是重組蛋白，甚至是多肽、DNA，所以免疫原的設計主要從兩個方面考慮：免疫原分子的特點抗體應用。結合免疫原分子的特點，抗體的應用可以提供預計識別的表位類型，確定使用哪種類型的免疫原和免疫原的序列。

2. DNA免疫的原理和方法是什么？
解答：將含有編碼某種抗原基因序列的質粒載體作為免疫原，直接導入動物細胞內進行表達，誘導宿主細胞對該抗原蛋白產生免疫應答，產生針對目的蛋白的抗體，再通過雜交瘤融合或基因文庫篩選獲得單克隆抗體，或通過血清純化獲得多克隆抗體。
DNA免疫方法，目前主要有3種：肌肉注射加電轉、靜脈高壓注射法和基因槍肌肉注射。

3. 對于同一種抗原，人源的噬菌體庫篩出的抗體和人體分離的抗體有什么區別？
解答：應該說各有優勢。人源的噬菌體庫篩選出的抗體，在一些情況下，可能會產生一些非天然存在的抗體，重鏈和輕鏈的配比不一定是天然的。從人體B細胞獲得的抗體，是直接分離和測序篩選的，抗體的重輕鏈處于天然狀態。當然，我們也不能說噬菌題庫篩選的抗體就不好，因為一般更多的是評價它的親和力和免疫應用，以及后續的生產表達及結構等，需要綜合評價。

4. 噬菌體展示淘洗固相篩選和液相篩選效果有差異嗎？
解答：結合遠慕生物多年的抗體篩選經驗，一般會首選固相淘選，因為這種方法比較簡單，不需要使用生物素標記。如果這種篩選方法沒有篩選到我們感興趣的抗體的話，我們也會過渡到液相篩選的方法。

5. 噬菌體淘洗怎么保證庫的多樣性？篩選上有什么注意的原則？
解答：淘洗過程中很多因素都會影響多樣性的結果，比如方法的選擇、固相、液相等。其次pH值是淘洗中一個重要參數。還有就是淘洗的力度和洗脫的時間也對多樣性結果有很重要的影響。需要多個方面進行試驗條件的優化。

6. 應用于IHC的單抗開發，在抗原設計上，有什么側重點？
解答：因為IHC的實驗過程涉及到了對它本身抗原的一個變性的過程，或者說是天然細胞里面靶點的變性過程。所以在設計的時候，我們會傾向于設計成一個線性的表位，所以一般來說我們傾向于使用多肽這種免疫原的方式，來進行免疫組化抗體的開發。

7. 噬菌體展示與雜交瘤制備抗體比較，哪種更好？
解答：這個可能更多是考慮噬菌體展示和雜交瘤的優缺點。首先從周期上來說的話，相對來說，噬菌體的方式時間更短一些，另外從篩選上來說的話，噬菌體展示的方法比較穩定，而且比較簡單一些，操作上具有優勢。但是雜交瘤的方法，畢竟是從一種類似于細胞內部產生抗體的方式，所以在某些方面的話，它產生的抗體更多的是天然的重鏈與輕鏈的配比，這一點，在噬菌體上不能做到百分之百。

8. 人源化抗體的制備噬菌體展示和轉基因小鼠平臺的優勢比較？
解答：噬菌體展示技術具有周期短、準確、不受氨基酸位點限制等特點，能夠通過多種淘洗和檢測方式對不同表位進行篩選，生產成本相對低廉。不足之處在于受到庫容、表達偏好性和展示效率的影響，抗體多樣性會存在一定程度的限制，同時通過表面重塑等方法對提高人源化抗體親和力的成功率并不穩定。

轉基因小鼠制備的全人源抗體，不僅大大減少了潛在的免疫原性，而且由于抗體是在體內產生，經歷了正常的裝配和成熟過程，從而保證抗體具有較高的靶親和力。大部分轉基因小鼠獲得的單克隆抗體親合力在0.1-10nM之間，也有些轉基因小鼠單抗能達到皮摩爾級或者次皮摩爾級。但其不足之處在于前期研發投入的周期長，成本高。而且也由于抗體是在小鼠體內裝配，因而產生的單抗具有鼠糖基化模式，使得這些單抗最終不是全人源化模式。

9. 抗體如何進行長期保存，并保持效價的穩定？
解答：一般情況下，抗體屬于比較穩定的蛋白。所以多數情況下，廠家會推薦-20℃~-80℃長期保存即可，為了避免反復凍融盡量分裝后保存。此外，也可以通過加甘油避免反復凍融。當抗體濃度低時加BSA減少抗體吸附起穩定劑的作用。對于一些少數抗體，需要通過優化篩選緩沖液已達到保持抗體穩定的效果，優化包括鹽濃度、pH、緩沖體系等。