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遠慕生物:常用的檢測核酸的方法

2020-05-26 14:20 作者:洛辰 來源:上海遠慕生物試劑
    Picogreen是一種極為靈敏的熒光核酸染料,常用于雙鏈DNA的定量檢測。歷來DNA濃度的測定在cDNA文庫的構建,DNA亞克隆、PCR產物的估測等領域中具有重要意義。疫苗等生物制品中殘留微量DNA的檢測更是直接關系到人類的健康。


    常用的檢測核酸的方法有:

    1)紫外吸光法(A260),該法操作簡便,但DNA樣品中核苷酸、單鏈DNA、RNA和蛋白質對紫外吸收信號影響很大,還容易受到核酸樣品中污染物的干擾,不能區分DNA和RNA,而且靈敏度低(ΔA260=0.1相當于5ug/ml的dsDNA);

    2)探針雜交法,該法是傳統檢測微量DNA的常用方法,基本能滿足目前疫苗和治療性生物制品的檢測需求,但是該法耗時較長,操作繁瑣,穩定性、敏感性和特異性較差;

    3)Hoechst33258染料法,Hoechst33258是一種一定程度上特異于雙鏈DNA的核酸染料,基本不受蛋白質的干擾,可以檢測低至10ng/ml的DNA;在檢測穩定性和靈敏度上仍達不到理想效果。

    Picogreen dsDNA定量法:Picogreen僅在與DNA雙鏈結合后才發出熒光,且所產生的熒光與DNA濃度呈正比,在存在ssDNA、RNA和單體核苷酸的條件下,可以選擇性地檢測低至25pg/ml的dsDNA。該分析在三個數量級范圍內呈線性,且幾乎無序列依賴性,可以精確地測量多個來源的DNA,包括基因組DNA、病毒DNA、小量提取DNA或PCR擴增產物。

    相比傳統的方法,Picogreen dsDNA Quantitation Reagent定量具有以下優勢:

    ①靈敏度高:數量級較UV吸光讀數更敏感,可節省寶貴的樣品;

    ②特異性強:在等摩爾的RNA存在的條件下,對dsDNA具有特異性;

    ③耐受性好:耐受較高濃度的鹽、尿素、乙醇、氯仿、去垢劑、蛋白或瓊脂糖,可以直接定量PCR擴增產物而無需從反應混合物中純化DNA。

    ④易于使用——只需在樣品中加入染料,等待5分鐘,然后讀數即可,且適用于96和384孔板;與大多數基于熒光的酶標儀和熒光計兼容。

    ⑤適用范圍廣:可適用于PCR的分析、芯片樣品、DNA損傷分析、酶活性分析、基因組DNA定量以及復雜混合物中dsDNA的檢測和病毒DNA定量等多種領域。

    若每次分析體積為2 mL,1ml Picogreen定量試劑足夠200次分析使用,若使用微孔板或96孔板檢測,每次使用量200μl,則足夠2000次分析。另外,我公司提供【雙鏈DNA(dsDNA)定量檢測試劑盒】方便客戶選用。

    儲存條件:4℃避光干燥,有效期6個月。

    注意事項

    1)Picogreen定量試劑含有DMSO(已知有毒試劑),請小心操作;

    2)盡管目前尚未有數據表明Picogreen具有誘變性和毒性,但是該試劑能結合雙鏈DNA,請操作時務必小心。
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