1.氰化高鐵血紅蛋白HiCN測定法：除SHb外
推薦參考方法，具有操作簡單、顯色快、結果穩定可靠、讀取吸光度后可直接定值等優點。致命的弱點是氰-化鉀(KCN)試劑有劇毒，使用管理不當可造成公害。
氰化高鐵血紅蛋白測定法操作

(1)直接測定法
①加轉化液：試管內加5ml　HiCN轉化液
②采血與轉化：取全血20μl，加到盛有轉化液的試管底部，用上清液反復沖洗吸管3次，充分混合，靜置5min。
③測定：以符合WH0標準的分光光度計，波長540nm處，光徑(比色杯內徑)1.000cm，HiCN轉化液或蒸餾水調零，測定吸光度(A)。
④計算：根據樣本的吸光度(A)直接計算出血紅蛋白濃度(g/L)
(A為測定管吸光度，44為毫摩爾消光系數，64458/1000為1mol/L Hb溶液中所含Hb克數，251為稀釋倍數。)


(2)HiCN標準液比色法測定
HiCN參考液(50g/L、100g/L、150g/L、200g/L)，分別測得540nm處的吸光度，以參考液血紅蛋白含量為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線或求出K值。
①標準曲線繪制和K值計算
②樣本吸光度
③通過標準曲線查出樣本血紅蛋白濃度，或用K值計算，血紅蛋白濃度Hb(g/L)=K×A。
 

注意事項
(1)HiCN貯存：轉化液貯存在棕色有塞玻璃瓶中，不能貯存在塑料瓶中，否則會使CN-丟失，測定結果偏低。HiCN轉化液在4℃保存一般可數月，不能在0℃以下保存，因為結冰可使高鐵氰-化鉀還原，試劑失效。
(2)標本：異常血漿蛋白質、高脂血癥、白細胞數超過30×109/L、脂滴等可產生濁度，干擾Hb測定。
(3)HiCN轉化液是一種低離子強度、pH近中性的溶液(7.2±0.2)。樣本中白細胞過高或球蛋白異常增高時，HiCN比色液會出現渾濁。
(4)氰-化鉀試劑是劇，測定后的廢液應收集于廣口容器中，首先以水稀釋廢液(1:1)，再按每升上述稀釋液加次氯酸鈉35ml，充分混勻，敞開容器，放置15h以上，使CN-氧化成C02和N2揮發，或水解成C032-和NH4+，再排入下水道。廢液不能直接與酸性溶液混合，因為氰化-鉀遇酸可產生劇毒的氰氫酸氣體。


2.十二烷基-硫酸鈉血紅蛋白SDS測定法：
具有操作簡單、呈色穩定、準確性和精確性符合要求、無公害等優點。但由于摩爾消光系數尚未最后確認，不能直接用吸光度計算Hb濃度，而且SDS試劑本身質量差異較大，會影響檢測結果。


3.HiN3最大吸收峰542nm，顯色快，結果穩定。