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MS培養基配方及其特點

2020-12-09 10:07 作者:洛辰 來源:上海遠慕生物試劑
植物組織培養概念(廣義)又叫離體培養,指從植物體分離出符合需要的組織、器官或細胞,原生質體等,通過無菌操作在人工控制條件下進行培養以獲得再生的完整植株或生產具有經濟價值的其他產品的技術。

植物組織培養概念(狹義)指用植物各部分組織,如形成層、薄壁組織、葉肉組織、胚乳等進行培養獲得再生植株,也指在培養過程中從各器官上產生愈傷組織的培養,愈傷組織再經過再分化形成再生植物。

MS培養基(Murashige and Skoog medium)是植物組織培養中最常見的培養基。很多植物的細胞、組織和器官在MS培養基上表現良好的生長和發育。1/2MS培養基,即MS培養基無機鹽濃度減半,也被廣泛采用。

1962年7月,Toshio Murashige 和Folke Skoog在 Physiologia Plantarum雜志發表了標題為A Revised Medium for Rapid Growth and Bio Assays with Tobacco Tissue Cultures的研究論文,其中提出了MS培養基的配方。

MS培養基淵源

Toshio Murashige作為Folke Skoog教授的博士生以煙草髓質(pith)和愈傷組織培養體系來尋找新的植物激素(organic growth factors)。Toshio Murashige在White培養基的基礎上,研究了氮磷鉀等十幾種元素在不同濃度下對煙草愈傷組織生長量的影響,通過繪制元素濃度——生物量曲線找到了上述元素的最大適宜濃度。

這些實驗發現,提升氮和鉀的濃度對煙草愈傷組織生物量的增加最為有效。

MS培養基最大的特點是無機鹽的濃度特別高,在常見的植物培養基中是最高的。

MS培養基中的氮元素含量特別高,達到了B5培養基的2.3倍,WPM培養基的4.8倍和White培養基的30倍。這也是有些植物的組織在MS培養基上生長發育受阻的原因,通常可以通過降低濃度來得到改善。

與生長良好的植物的平均元素組成相比,MS培養基中氮和鉀元素是足夠的,而磷、鈣和鎂的含量明顯較低。

每種植物的元素組成都有其特點,根據這些特點調整培養基的配方可以提升離體培養的效果。

培養基的配制

配制培養基有兩種方法可以選擇,一是購買培養基中所有化學藥品,按照需要自己配制;二是購買商品的混合好的培養基基本成分粉劑,如MS、B5等。自己配制可以節約費用,但浪費時間、人力、且有時由于藥品的質量問題,給實驗帶來麻煩。就目前國內的情況看,大部分還是自己配制。

1、配制幾種母液

一般配制成100倍MS有機母液。配成1L母液,倒入1L試劑瓶中,存放于冰箱中。

1.1配制MS大量元素母液

1.2配制MS微量元素母液

1.3配制MS有機母液

1.4配制MS鐵鹽母液

MS母液有5種大量元素母液,加上MS微量元素母液、MS有機母液和MS鐵鹽母液,共8種母液。

2、激素母液的配制

各種生長素和細胞分裂素要單獨配制,不能混合在一起,生長素類一般要先用少量95%的酒精或1當量的NaOH溶解,細胞分裂素一般要先用1當量的鹽酸溶解,然后再加蒸餾水定容。一般取100mg配成100ml母液。

3、配制培養基

以配置1L MS培養基為例,按順序進行如下操作:

3.1先在燒杯中放入一些蒸餾水。

3.2分別取上面八種母液10ml倒入。

3.3一般稱取30g蔗糖倒入,攪拌溶解。

3.4加蒸餾水用量筒定溶至1L。

3.5按設計好的方案添加各種激素,由于激素的用量很小,而且激素對組培植物的生長至關重要。所以有條件的話最好用微量可調移液器吸取,減少誤差。

3.6用精密試紙或酸度計調整PH至5.7~5.8。(有條件的話使用酸度計,比較精確) 可配1當量的HCL和1當量的NaOH用來調溶液PH值。

1當量HCL配制:用量筒量取8.3ml配成100ml溶液。

1當量NaOH配制:稱取NaOH 4g 配成100ml溶液。

3.7稱取5g左右瓊脂粉(質量好的瓊脂粉),倒入上面配好的溶液中,放在電爐上加熱至沸騰,直到瓊脂粉熔化。

3.8稍微冷卻后,分裝入培養容器中。無蓋的培養容器要用封口膜或牛皮紙封口,用橡皮筋或繩子扎緊。

3.9放入消毒滅菌鍋滅菌,滅菌20分鐘左右。

3.10滅菌后從滅菌鍋中取出培養基,平放在實驗臺上令其冷卻凝固。
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