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細(xì)胞生理活動的實驗觀察

2021-01-05 11:00 作者:洛辰 來源:上海遠(yuǎn)慕生物試劑
【實驗?zāi)康摹?br> 通過制片與觀察加深理解細(xì)胞的運動、吞噬等生理活動。
【實驗用品】
一、材料和標(biāo)本 雄性蟾蜍、小白鼠、l%雞血懸液、6%淀粉肉湯、草履蟲。
二、器材和儀器 光鏡、2ml注射器、載玻片、蓋玻片、解剖器材、滴管、移液管、試管、玻璃片、黑紙。
三、試劑 0.3%臺盼蘭、1%剛果紅。


【實驗內(nèi)容】
一、細(xì)胞的吞噬活動
(一)原理
白細(xì)胞是機(jī)體防御系統(tǒng)中能游走的單位。它分為粒細(xì)胞系、單核細(xì)胞系、淋巴系三類。它們有許多生理功能,如游走性、變形運動、趨化性、吞噬異物等。在白細(xì)胞中,以粒細(xì)胞、單核細(xì)胞的吞噬活動較強(qiáng),故稱此二類細(xì)胞為吞噬細(xì)胞。單核細(xì)胞由血液進(jìn)入組織后逐漸演變成巨噬細(xì)胞。吞噬細(xì)胞主要靠吞噬來處理異物。吞噬細(xì)胞首先由于趨化作用而向異物游走,然后伸出偽足包圍異物,并發(fā)生內(nèi)吞作用形成吞噬泡將異物吞入細(xì)胞,繼而溶酶體與吞噬泡融合消化異物。

(二)小白鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬活動的觀察
l.實驗前二天,每天向小鼠腹腔注射6%淀粉肉湯O.5~1ml(含O.3%臺盼蘭,起標(biāo)記作用),以刺激腹腔產(chǎn)生較多的巨噬細(xì)胞(此步由教師在實驗前進(jìn)行完畢)。
2.實驗時,每組取一只經(jīng)上述處理的小鼠,腹腔注射1%雞血懸液0.5~1ml,注射后輕揉小鼠腹部以使紅細(xì)胞懸液分散均勻。
3.1小時后,用頸椎脫位法處死小鼠,迅速剖開小鼠腹壁,向腹腔注入O.5ml~1ml生理鹽水,用牙簽輕輕攪拌使生理鹽水與腹腔液混勻。
4.用注射器抽取腹腔液,滴片,然后蓋上蓋片。
5.鏡檢,高倍鏡下畫圖記錄所見結(jié)果。
 
二、暗視野觀察細(xì)胞的纖毛和鞭毛運動
(一)原理
暗視野照明法是一種不使照射被檢物體的光線直接進(jìn)入物鏡的照明方法。常常用它來觀察沒有染色的活體細(xì)胞或膠體粒子。利用此照明法,在鏡檢時不能直接看到通過標(biāo)本的照明光線,只有被檢物體反射或衍射的光線進(jìn)入物鏡可以提高分辨率,在暗視野中可以看到明亮的被檢物體的存在和運動,但它們的內(nèi)部結(jié)構(gòu)卻看不清楚。
(二)自制遮光板變普通顯微鏡為“簡單的暗視野顯微鏡”。

步驟:
1.將顯微鏡聚光器調(diào)到最高位,用低倍鏡調(diào)焦至清楚。
2.取下目鏡,從鏡筒中觀察并調(diào)節(jié)光圈的大小,使其與鏡筒中所見物鏡的視野相等。
3.放一塊透明玻璃于載物臺透光孔上,用尺子測量光圈孔徑。
4.用黑紙剪成與調(diào)節(jié)后光圈孔徑一樣大小的中央遮光板。
5.將中央遮光板放置在顯微鏡的濾光框上,即可進(jìn)行標(biāo)本的暗視野觀察。
注:如果使用高倍鏡觀察標(biāo)本時,應(yīng)按高倍鏡調(diào)焦的視野大小重新制作中央遮光板。
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