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細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)產(chǎn)生細(xì)菌污染怎么辦

2021-04-02 10:33 作者:洛辰 來源:上海遠(yuǎn)慕生物試劑
細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中,經(jīng)常會(huì)遇到諸如外源污染、真菌污染、支原體污染、操作不當(dāng)?shù)雀鞣N問題,為解救細(xì)胞,需要針對(duì)不同問題對(duì)癥下藥,那么,細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)產(chǎn)生細(xì)菌污染該如何解決呢?

細(xì)菌是一種原核細(xì)胞微生物,其大小以微米(μm)計(jì)。常見的污染細(xì)菌有革蘭氏陰性菌和大腸桿菌、假單胞菌等,革蘭氏陰性菌中白色葡萄球菌等比較常見。

一旦發(fā)生細(xì)菌污染較易發(fā)現(xiàn),多數(shù)情況下培養(yǎng)液短期內(nèi)顏色變黃,表明有大量酸性物質(zhì)產(chǎn)生,出現(xiàn)明顯混濁現(xiàn)象;有時(shí)靜置的培養(yǎng)液液體初看不混濁,但稍加振蕩,就有很多混濁物漂起。倒置顯微鏡下觀察,可見培養(yǎng)液中有大量圓球狀顆粒漂浮。必要時(shí)可取少量培養(yǎng)液涂片染色檢查以證實(shí)細(xì)菌種類;有的培養(yǎng)液改變不明顯而又疑有污染,可取出少量培養(yǎng)液用普通肉湯接種或用未加雙抗藥物的培養(yǎng)液接種,也可取10ml細(xì)胞懸液以100rpm離心5min,沉淀中加入無抗生素的培養(yǎng)液2ml,置于37℃培養(yǎng),24h可得結(jié)果。

污染后細(xì)胞發(fā)生病理改變,胞內(nèi)顆粒增多、增粗,最后變圓脫落死亡,造成試驗(yàn)失敗和細(xì)胞株(系)丟失。一旦發(fā)現(xiàn)細(xì)胞被細(xì)菌污染,需要采取如下解決方案:

(1) 丟棄所有已經(jīng)污染的細(xì)胞和培養(yǎng)基;

(2) 培養(yǎng)環(huán)境用新潔爾滅擦拭且UV滅菌24小時(shí);

(3) 培養(yǎng)試劑中加入P/S雙抗。

此外,在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)盡可能使用一次性耗材及成品培養(yǎng)基,以減少細(xì)菌污染的可能性。
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