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防止和清除核酸污染假陽性,關鍵點在哪里?

2021-05-12 11:09 作者:洛辰 來源:上海遠慕生物試劑
核酸檢測技術有諸多優點,但由于其超高的靈敏度,一旦實驗室出現核酸污染,很容易導致假陽性結果,從而影響檢測的準確性。樣本處理環節抽提核酸和檢測環節擴增產物泄露均會導致核酸污染,飛濺的擴增產物會形成氣溶膠漂浮在空氣中,粘附到物體表面及檢測人員身體 上,隨著人員及物料流動而污染整個實驗室。實驗室一旦發生核酸污染極難清除,會造成實驗室短期內無法開展工作,因此防范和清除核酸污染是分子檢測實驗室的工作重點。

目前的核酸檢測均采用閉管檢測以防止開蓋形成氣溶膠,同時采取嚴格的物理隔絕法,檢測依次分為試劑準備區-樣本準備區-擴增區-產物檢測區,且逐級壓,這些策略都最大程度地防止了氣溶膠污染,但核酸污染事故依然時有發生。由于核酸檢測步驟較多,且多個環節樣本直接暴露于空氣中,任何一個環節出現一點小紕漏就容易導致整個實驗室的污染。即使嚴格按照規程操作,核酸污染依然無法徹底避免。

核酸污染主要體現在樣本核酸或擴增產物在臺面、設備、檢測人員表面的核酸殘留,以及擴增產物形成的氣溶膠。氣溶膠由于顆粒較小,若不做處理可長期漂浮在空氣中持續影響實驗室的檢測。

核酸實驗室污染的主要原因有:①標本污染; ②試劑污染;③ 產物污染;④ 設備污染;⑤ 其他污染。

其解決措施 為:

①標本污染:重新采樣進行檢測,評估標本前處理環節;

②試劑污染:更換新的試劑重新檢測評估;

③設備污染:設備整體消毒清潔、維護;

④產物污染:全面清潔消毒實驗室、儀器設備所有實驗有關用品。

發現污染,檢測工作應立即停止,直到確認消除污染后才能重新開始檢測。首先,要查找污染源和明確污染范圍。然后,根據污染源和污染范圍采取有效的去污染措施,結合各種不同方法以達到最佳效果。

實驗室污染的處理:

1.標本污染生物安全柜的操作臺造成局限污染時:

立即用吸水紙覆蓋,并使用0.55%含氯消毒劑進行噴灑消毒。消毒液需要現用現配,24小時內使用。

2.標本傾覆造成實驗室污染時:

保持實驗室空間密閉,避免污染物擴散。立即使用潤濕有0.55%含氯消毒劑的毛巾覆蓋污染區。必要時(如大量溢撒時)可用過氧化氫加熱熏蒸實驗室,劑量為2g/m?,熏蒸過夜;或20g/L過氧乙酸消毒液用氣溶膠噴霧器噴霧,用量8ml/m?,作用1-2小時;

3.清理污染物時:

嚴格遵循活病毒生物安全操作要求,采用壓力蒸汽滅菌處理,并進行實驗室換氣等,防止次生危害。
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