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Ehrlich蘇木素染色液操作步驟

2021-06-28 14:16 作者:洛辰 來源:上海遠慕生物試劑
中文名稱:Ehrlich蘇木素染色液
規格:100ml|500ml
用途:屬于常規切片HE染色的明礬蘇木素的一種,尤其適用于教學和科研上的核染色質染色,也可用于黏蛋白染色(如軟骨的黏多糖),推薦用于骨和軟骨的染色。
注意事項:經酸處理過的切片染色以及核的染色、骨和軟骨的染色中leagene推薦采用該試劑。冷凍切片染色效果不佳,成熟時間2個月,染色時間一般15-20分鐘。
儲存條件:室溫,24個月

簡介:蘇木素(Hematoxylin)和伊紅(Eosin)聯合染色簡稱HE染色,是病理學和組織學最常用的一種染色方法。蘇木精為堿性天然染料,可使細胞核著色。細胞核內染色質的主要成分是DNA,在DNA的雙螺旋結構中,兩條核苷酸鏈上的磷酸基向外,使DNA雙螺旋的外側帶負電荷,呈酸性,很容易與帶正電荷的蘇木精堿性染料以離子鍵或氫鍵結合而被染色。蘇木素成熟的方法有自然氧化法、化學氧化法。自然氧化是指暴露于光和空氣中,這個過程比較緩慢,約需3~6個月不等,但生成物染色能力可維持很長時間。EhrlichE和Delafield蘇木素就屬于這種。Ehrlich蘇木素作為一種良好的核染色液,也可用于黏蛋白染色如軟骨的黏液多糖,骨和軟骨的染色也推薦使用Ehrlich蘇木素染液。

Jimei Ehrlich蘇木素染液非常穩定,成熟后密封可保存2年。對核染色質染得很清晰細致,染色時間也稍長,約15~20min。適用于教學和科研上的制片染色,用此染色液對冷凍切片染色則不理想。


染色原理:
1、細胞核染色的原理:蘇木素為堿性天然染料,可使細胞核著色。細胞核內染色質的成分主要是DNA,在DNA雙螺旋結構中,兩條核苷酸鏈上的磷酸基向外,使DNA雙螺旋的外側帶負電荷,呈酸性,很容易與帶正電荷的蘇木素堿性染料以離子鍵或氫鍵結合而被染色。蘇木素在堿性溶液中呈藍色,所以細胞核被染成藍色。
2、細胞漿染色的原理:伊紅是一種化學合成的酸性染料,在一定條件下可使細胞漿著色。細胞漿的主要成分是蛋白質,為兩性化合物,細胞漿的染色與染液的pH值密切相關。當染色液pH值在胞漿蛋白質等電點(4.7~5.0)以下時,胞漿蛋白質以堿式電離,則細胞漿帶正電荷,就可被帶負電荷的酸性染料染色。伊紅在水中離解成帶負電荷的陰離子,與胞漿蛋白質帶正電荷的陽離子結合,使細胞漿著色,呈現紅色。
3、分化作用:染色后,用某些特定的溶液將組織過多結合的染色劑脫去,這個過程稱為分化作用,所用的溶液稱為分化液。在HE染色中常用1%鹽酸乙醇作為分化液,因酸能破壞蘇木素的醌型結構,使組織與色素分離而退色。大多數組織經蘇木素染色后,必須用1%鹽酸乙醇分化,使細胞核過多結合的蘇木素染料和細胞漿吸附的蘇木素染料脫去,再進行伊紅染色,才能保證細胞核與細胞漿染色的分明。
4、返藍作用:分化之后,蘇木素在酸性條件下處于紅色離子狀態,呈紅色;在堿性條件下處于藍色離子狀態,呈藍色。組織切片經酸性乙醇分化后呈紅色或粉紅色,立即用水除去組織切片上的酸而中止分化,再用弱堿性水使蘇木素染上的細胞核呈現藍色,這個過程稱為返藍作用或藍化作用。另外用自來不浸洗也可使細胞核返藍,但所需時間較長。

自備材料:
1、酸性乙醇分化液
2、藍化液,如稀氨水、碳酸鋰溶液等
3、系列乙醇
4、伊紅染色液
5、4%多聚甲醛


操作步驟(僅供參考)
(一)石蠟切片染色
1、切片脫蠟至水①二甲苯作用2次,每次5~10min。
②(可選)無水乙醇作用2次,每次3~5min。
③95%的乙醇3~5min。
④90%的乙醇3~5min。
⑤80%的乙醇3~5min。
⑥自來水或蒸餾水沖洗1~3min。

2、染色
①Ehrlich蘇木素染色液染色15~20min。
②自來水或蒸餾水沖洗5~10s。
③(可選)鹽酸乙醇分化2~5s。
④自來水沖洗20~30s。
⑤(可選)藍化液返藍20~40s。
⑥自來水沖洗30~60s。
⑦伊紅染色液染色3~5min。
⑧自來水沖洗1~5s。

3、脫水、透明、封固
①80%乙醇10~20s。
②90%乙醇10~20s。
③95%乙醇作用2次,每次1~2min。
④無水乙醇作用2次,每次2~3min。
⑤二甲苯透明3次,每次2~3min。
⑥中性樹脂封片。
染色結果:細胞核呈藍色;細胞質、肌纖維、膠原纖維等呈深淺不一的紅色;角蛋白、紅細胞等呈明亮的橙紅色。

(二)細胞染色
1、4%多聚甲醛固定10~20min。
2、自來水沖洗2次,每次2min。
3、蒸餾水沖洗2次,每次2min。
4、染色、脫蠟、透明、封固步驟同石蠟切片的染色步驟,作用時間應相應縮短。
染色結果:細胞核呈藍色;細胞質、纖維呈紅色。


注意事項:
1、切片脫蠟應盡量干凈。系列乙醇應經常更換新液。
2、鹽酸乙醇分化時間應根據切片厚薄、組織類別以及新舊而定,另外分化后自來水沖洗時間應該足夠,以便徹底清洗酸。
3、藍化液常使用0.2~1%氨水或Scott促藍液或0.1~1%碳酸埋溶液。
4、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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