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瓊脂糖凝膠2B使用方法

2022-01-06 13:50 作者:洛辰 來源:上海遠慕生物試劑
中文名稱:瓊脂糖凝膠2B
英文名稱:Sepharose 2B
規格:BR
貨號:YM-A3467G
包裝:100ml、500ml

性狀:白色微球, 無嗅、無味
凝膠類型:凝膠過濾填料,凝膠層析介質
結構成分:2%交聯度瓊脂糖
粒徑:60-200μm
工作PH值:4-9
操作溫度:4-40℃
分離范圍:70,000-40 ×106
保存條件:4℃~25℃
應用:蛋白、大分子復合物、病毒、核酸、多糖的分離、分子量測定等。

本產品為傳統的瓊脂糖介質,非特異性吸附低,回收率高,可多次重復使用等特點,用于分子量差異大、對分辨率要求不高的樣品的凝膠層析純化。下面簡要介紹介質的使用過程。

1、裝柱
凝膠過濾介質的使用對裝柱的要求較高,為了保證分離效果,一般通過柱子上加一個裝柱器來使分離柱裝滿凝膠,或采用帶有軸向加壓裝置的柱子。凝膠柱床一般高于60cm。裝柱效果可用染料或丙酮-水溶液進行檢驗。以下過程為通用介質裝填過程。若為帶有軸向加壓裝置的柱子,可在柱床穩定后將柱床壓緊,接好管路。
(1)讓所有的材料和試劑達到室溫。配制緩沖液。凝膠層析上樣、平衡和洗脫只用一種低鹽濃度的緩沖液。
(2)選擇一根一定直徑的柱子,長約30~60cm,根據柱子大小取所需量的凝膠(約為柱床體積的1.15倍),清洗掉20%乙醇,抽干,用緩沖液(按凝膠:緩沖液=3:1的比例)配成勻漿。不要劇烈攪動,以免攪壞微球。
(3)將柱內及柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液位(液面略高于濾膜),務必使底端無氣泡。
(4)用玻璃棒引導勻漿沿著柱內壁一次性倒入柱內,注意勿使產生氣泡。打開柱子出液口,使凝膠在柱內自由沉降,連結好柱子頂端柱頭。
(5)打開蠕動泵,讓緩沖液緩慢流過,使柱床穩定。
(6)最好用一個裝柱器輔助裝柱。裝完后柱床上端輕輕刮平,上好柱頭。

2、平衡
讓緩沖液以一定流速流過柱子,到流出液電導和pH不變。

3、上樣
(1)樣品用緩沖液配制,渾濁的樣品要離心和過濾后上樣。含鹽量過大、濃度過小的樣品要先做處理,再上樣。
(2)介質對樣品組分的分離是按組分分子量大小進行的,分子量大的先流出來。
(3)上樣體積約為柱體積的1~2%,越小分離越好。

4、洗脫
用緩沖液洗脫,洗脫中保持流速、緩沖液組成不變。

5、再生
一般用緩沖液洗到平衡,可再次使用。

6、注意
在裝柱、使用和保存柱子的時候,始終要避免柱子流干氣泡進入。
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