葡聚糖凝膠 G 系列使用說明
1 化學和物理性質
葡聚糖凝膠是一種珠狀的凝膠，含有大量的羥基，很容易在水中和電解質溶液中溶脹。親水基質使其非特異性吸附最小化，并在生物分子分離期間得到較高的回收率。G型的葡聚糖凝膠有各種不同的交聯度，因此它們的溶脹度和分級分離范圍也有所不同。葡聚糖凝膠的溶脹度基本上不因鹽和洗滌劑的存在而受影響。

2 產品說明
產 品 名 稱     球蛋白分離范圍  應 用     最大耐壓 MPa
葡聚糖凝膠 G-10  <700        緩沖液交換、脫鹽，分離小分子，去除小分子 0.15
葡聚糖凝膠 G-15  <1500       緩沖液交換、脫鹽，分離小分子，去除小分子 0.15
葡聚糖凝膠 G-25  1000-5000   工業上脫鹽及交換緩沖液 0.15
葡聚糖凝膠 G-50  1000-30000  多肽分離、脫鹽、清洗生物提取液、分子量測定 0.10
葡聚糖凝膠 G-75  2000-70000  蛋白分離純化、分子量測定、平衡常數測定 0.016
葡聚糖凝膠 G-100 2000-120000 蛋白分離純化、分子量測定、平衡常數測定 0.0096
葡聚糖凝膠 G-150 5000-300000 蛋白分離純化、分子量測定、平衡常數測定 0.0096
葡聚糖凝膠 G-200 5000-600000 蛋白分離純化、分子量測定、平衡常數測定 0.0096

3 使用方法
Sephadex 系列產品以干粉形式存在，使用前必須溶脹，在膨脹期間應避免過度攪拌，因為它可能破壞填料，不要使用磁力攪拌器。

3.1 填料的準備
（1）將填料在過量去離子水或緩沖液中，室溫條件下膨脹 24 小時，或用熱水膨脹 1 小時。洗脫緩沖液不應含有高粘度的試劑。溶脹過程中，如果上層有漂浮物，請去除。
（2）將溶脹好的填料，所有的緩沖液等材料平衡至實驗操作溫度，對所有的緩沖液進行脫氣處理。

3.2 裝柱
（1）檢查層析柱所有部件，特別是過濾網，密封圈，螺旋塞是否緊密，玻璃管是否干凈和完整。
（2）將柱內及柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液位，務必使底端無氣泡。
（3）用玻璃棒引導勻漿沿著柱內壁一次性倒入柱內，注意勿使產生氣泡。打開柱子出液口，使凝膠
在柱內自由沉降，連結好柱子頂端柱頭。

（4）打開蠕動泵，讓緩沖液用使用時流速的 1.33 倍的流速流過，使柱床穩定（注意壓力不要超過填料最大耐壓）。
3.3 平衡
上樣前平衡層析柱至少 5-10 個柱體積直到記錄儀基線變得平穩為止（流出液的 pH 值和電導值等于上柱的 Buffer 的 pH 值和電導值）。

3.4 上樣
樣品一定要離心或過濾后（0.45um 濾膜）上樣。凝膠過濾的上樣量一般為不大于 5%的柱床體積，我們建議初次上樣控制在 1-2%的柱床體積，視分離情況可以調整；脫鹽時上樣量可以達到 20%的柱床體積，柱高的選擇也與分離要求相關，柱子越高，分離效果相應越好，但是，柱高過高的凝膠柱會引起較大的反壓，也應當盡可能避免。難分離物質要有一定柱高和流速控制，脫鹽時高徑比為 5：1 即可。

3.5 洗脫方法
可以用無鹽水，也可以采用上柱時的緩沖液洗脫。

3.8 在位清洗（CIP）
凝膠使用十次后作一次 CIP，目的是去除柱床內沉淀的及頑固殘留的蛋白。方法是用 0.1 M 氫氧/化鈉洗 2 個柱體積，再以至少 10 個柱體積平衡緩沖液再生。

4 保存
未處理的填料，室溫密閉保存。使用完的填料，用純水將鹽分徹底沖洗，最后保存在 20%乙醇中，4℃保存。

5 注意事項：
（1）上樣之前，樣品必須經過膜過濾及去除色素，否則雜質及色素會被吸附到填料上，影響填料的
正常使用。所有的緩沖液均需要用 0.45um 的過濾器過濾。
（2）在使用過程中，避免使用高濃度的強酸強堿，酸和堿的濃度應低于 0.1 摩爾。堿會使流速變慢。
（3）不同的樣品，吸附和洗脫方法不相同，可以根據相關的文獻進行。

6 不同規格特性
細顆粒：流速慢，分離 果最優。
粗顆粒：流速快，分離效果偏差。
中顆粒：流速適中，分離效果適中，一般客戶最常選用此型號。