無淀粉改良羅氏培養基說明書
2022-03-11 16:38 作者:洛辰 來源:上海遠慕生物試劑
中文名稱:無淀粉改良羅氏培養基
產品規格:250g
保質期:三年
產品用途:用于結核桿菌分離培養
無淀粉改良羅氏培養基是結核桿菌分離培養的分離鑒定培養基。無淀粉改良羅氏培養基全稱羅-琴(L-J)培養基(Lowenstein-Jenden medium)主要組成分新鮮雞蛋液、谷氨酸鈉、甘油、孔雀石綠、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、檸檬酸鎂。
分枝桿菌等痰液細菌在人工培養時,必須有足夠的營養成分。谷氨酸鈉為細菌生長提供氮源;雞卵液不僅是良好的營養物質,而且還能降低脂肪酸的毒性;甘油和枸櫞酸鹽可補充碳源;鉀、鎂、磷、硫等無機鹽也是細菌生長不可缺乏的生長元素;磷酸鹽有緩沖作用;因此,培養基能提供大多數分枝桿菌良好的生長環境。結核分枝桿菌為細長略帶彎曲的桿菌,大小1~4X0.4μm。分枝桿菌則比較粗短。分枝桿菌屬的細菌細胞壁脂質含量較高,約占干重的60%,特別是有大量分枝菌酸(mycolic acid)包圍在肽聚糖層的外面,可影響染料的穿入。分枝桿菌一般用齊尼(Ziehl-Neelsen)抗酸染色法,以5%石炭酸復紅加溫染色后可以染上,但用3%鹽酸乙醇不易脫色。若再加用美藍復染,則分枝桿菌呈紅色,而其他細菌和背景中的物質為藍色。本菌無芽孢、無鞭毛。結核分枝桿菌最適溫度為37℃,低于30℃不生長。結核分枝桿菌細胞壁的脂質含量較高,影響營養物質的吸收,故生長緩慢。在一般培養基中每分裂1代需時18~24小時,營養豐富時只需5小時。
應用說明:用于對羅氏培養基進一步改良的初步研究
雞蛋為基礎的羅氏(Lowenstein Jensen,L-J)培養基作為培養結核分枝桿菌的一種固體培養基一直被廣泛地應用于臨床,它是目前培養結核分枝桿菌最為常用的培養基之一,也是最有代表性的一種,具有價廉、制作方法簡便、便于觀察菌落形態等特點。因為其成分內添加了抑制普通細菌生長的孔雀綠,所以羅氏培養基上罕有普通細菌(霉菌除外)生長的報道。在羅氏培養基成分中添加不同的抑菌物質觀察該鏈球菌與結核菌的生長情況方法:收集臨床分離的人型(M.TB)、牛型(M.b)結核分枝桿菌、鏈球菌(S)各一株,H37Rv結核標準菌株作為質控菌種,共4株分別接種于添加50.0(mg/ml)羧芐青霉素(Carbenicillin,以下簡稱為C)和/或硒酸鈉5、10、20(μg/ml)羅氏培養基上,以未作接種的該羅氏培養基作為空白對照,37?0.2℃培養4周觀察菌落生長情況。結果:新改良的羅氏培養基中加入的羧芐青霉素(C)和一定量的硒酸鈉對該鏈球菌均有不同程度的抑制作用,而含20(μg/ml)硒酸鈉、羧芐青霉素(C)+10(μg/ml)硒酸鈉或羧芐青霉素(C)+20(μg/ml)硒酸鈉均可完全抑制該鏈球菌的生長;除含20(μg/ml)硒酸鈉和羧芐青霉素(C)+20(μg/ml)硒酸鈉兩種羅氏培養基對3株結核分枝桿菌有輕度抑制作用外,其余均對結核分枝桿菌生長無明顯影響。