斐林試劑(GB/T 5009.7-2016)

供應(yīng)商：遠(yuǎn)慕生物

貨號(hào)：R19048 

規(guī)格：2×100ml

保存：RT密封，避光，有效期6個(gè)月。

試劑(A): Fehling's solution A100ml RT

試劑(B): Fehling's solution B 100ml RT

產(chǎn)品內(nèi)容：

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

斐林試劑(Fehling's Reagent)又稱(chēng)菲林試劑或裴林試劑，是德國(guó)化學(xué)家Hermann von Fehling 1849年所發(fā)明，與班氏試劑(Benedict's Reagent)相似，均是用來(lái)檢測(cè)還原糖的存在，其原理是與可溶性的還原性糖(葡萄糖、果糖和麥芽糖)在加熱的條件下，能夠生成磚紅色的氧化亞銅沉淀。

斐林試劑(GB/T 5009.7-2016)是根據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)(食品中還原糖的測(cè)定)推薦的直接滴定的方法，主要由酒石酸鈉鉀、硫酸銅、亞甲藍(lán)、亞鐵氰化鉀等組成，本產(chǎn)品的成分、原理和用途與斐林試劑(Fehling's Reagent)(貨號(hào)TC0002)稍有區(qū)別。斐林試劑(GB/T 5009.7-2016)主要用于含淀粉食品、酒精飲料、碳酸飲料、肉制品、蜜餞等食品中還原糖的定量檢測(cè)；總糖的含量也可以測(cè)定，但需要提前水解后才能檢測(cè)，也可用于還原糖的定性試驗(yàn)，該方法的檢測(cè)原理是試樣經(jīng)去蛋白處理后以亞甲藍(lán)為指示劑，在加熱條件下滴定標(biāo)定過(guò)的斐林試劑(A液與B液等量混合生成的可溶性藍(lán)色的酒石酸鉀鈉銅絡(luò)合物，也稱(chēng)作堿性酒石酸銅溶液），樣品中的還原糖將酒石酸鉀鈉銅中的二價(jià)銅還原成紅色的氧化亞銅沉淀，氧化亞銅沉淀又與亞鐵氰化鉀反應(yīng)生成可溶性的無(wú)色絡(luò)合物，當(dāng)二價(jià)銅全部被還原，稍過(guò)量的還原糖把亞甲藍(lán)還原，溶液就由藍(lán)色變?yōu)闊o(wú)色，即為滴定終點(diǎn)，根據(jù)樣品液的消耗體積計(jì)算還原糖含量；本產(chǎn)品未經(jīng)標(biāo)定，需客戶(hù)自行標(biāo)定。該試劑僅適用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。

自備材料:

試管、錐形瓶、容量瓶、玻璃珠

2、水浴鍋、酒精燈等加熱裝置

3、葡萄糖、果糖、轉(zhuǎn)化糖等還原糖標(biāo)準(zhǔn)(1mg/ml)

4、50%鹽酸水溶液、氫氧化鈉溶液

Z酸鋅溶液、亞鐵氰化鉀溶液

分析天平、酸式滴定管

操作步驟（僅供參考）：

1、Fehling's Reagent的標(biāo)定:

25ml的酸式滴定管中加入還原糖標(biāo)準(zhǔn)溶液(1mg/m)約15ml ,向150ml錐形瓶中依次加入Fehling's Reagent A液和B液各5ml，再向其中加入10ml水和2~4粒玻璃珠，加熱錐形瓶,控制時(shí)間在2min內(nèi)沸騰,保持沸騰以每2秒1滴的速度滴加還原糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，直到溶液藍(lán)色剛好褪去為終點(diǎn)，記錄消耗標(biāo)準(zhǔn)溶液的總體積，平行操作3次,取平均值，計(jì)算每10ml Fehling's Reagent(A、B液各5ml)相當(dāng)于還原糖的質(zhì)量(mg)。

2、試樣準(zhǔn)備:

1)含淀粉食品:稱(chēng)取粉碎或混勻后的試樣10~ 20g(精確到0.001g )置于250ml容量瓶中，

加水200ml,45°C水浴中加熱1h，并時(shí)時(shí)振搖,冷卻后加水至刻度,混勻，靜置,沉淀，

吸取200.00ml.上清液置于另一250ml 容量瓶中,緩慢加入乙酸鋅溶液和亞鐵氰化鉀溶液

各5ml ,加水至刻度,混勻靜置30min ,用干燥濾紙過(guò)去，棄去初濾液,后續(xù)濾液備用。

2)酒精飲料:稱(chēng)取混勻后的試樣100g(精確到0.01g ),置于蒸發(fā)皿上，用氫氧化鈉溶液中

和至中性，在水浴上蒸發(fā)至原體積的1/4后移入250ml容量瓶中,緩慢加入乙酸鋅溶液和

亞鐵氰化鉀溶液各5ml ,加水至刻度，混勻靜置30min，用干燥濾紙過(guò)去，棄去初濾液，

后續(xù)濾液備用。

3)碳酸飲料:稱(chēng)取混勻后的試樣100g(精確到0.01g)置于蒸發(fā)皿上,在水浴上微微攪拌除

去二氧化碳后移入250ml容量瓶中，用水洗滌蒸發(fā)皿，并入容量瓶,加水至刻度,混勻后

備用。

4)其他食品:稱(chēng)取粉碎后的固體試樣2.5~ 5g(精確到0.001g )咸混勻后的液體試樣5~25g

(精確到0.001g )置于250ml容量瓶中,加水50ml，緩慢加入乙酸鋅溶液和亞鐵氰化鉀

溶液各5ml ,加水至刻度,混勻靜置30min ,用干燥濾紙過(guò)去，棄去初濾液,后續(xù)濾液備

用。

3、試樣溶液預(yù)測(cè):

25ml的酸式滴定管中加入試樣溶液約15m,向150ml錐形瓶中依次加入Fehling's

Reagent A液和B液各5ml，再向其中加入10ml水和2~4粒玻璃珠,加熱錐形瓶,控制

時(shí)間在2min內(nèi)沸騰, 保持沸騰以先快后慢的速度滴加試樣溶液, 待溶液顏色變淺時(shí)以每2

秒1滴的速度滴加,直到溶液藍(lán)色剛好褪去為終點(diǎn),記錄消耗試樣溶液的總體積。(注:試

樣溶液中還原糖濃度過(guò)高時(shí), 應(yīng)適當(dāng)稀釋后再行測(cè)定;盡量使每次滴定消耗樣液的體積和標(biāo)定斐林試劑所消耗的還原糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積相近約10ml ;當(dāng)濃度過(guò)低時(shí)可直接加入10ml試樣溶液，不再加10ml水，再用還原糖標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至終點(diǎn)，記錄消耗的體積與標(biāo)定時(shí)消耗的還原糖體積之差相當(dāng)于10ml樣液中所含還原糖的質(zhì)量。)

4、試樣溶液測(cè)定:

25ml的酸式滴定管中加入試樣溶液約20ml向150ml錐形瓶依次加入Fehling's Reagent

A液和B液各5ml再向其中加入10ml水和2~4粒玻璃珠加熱錐形瓶控制時(shí)間在2min

內(nèi)沸騰,保持沸騰以每2秒1滴的速度滴加試樣溶液，直到溶液藍(lán)色剛好褪去為終點(diǎn)，記

錄消耗試樣溶液的總體積,平行操作3次,取平均值。

結(jié)果計(jì)算:

試樣中還原糖的含量(以某種還原糖計(jì))按下邊公式計(jì)算:

當(dāng)濃度過(guò)低時(shí),試樣中還原糖的含量(以某種還原糖計(jì))按下邊公式計(jì)算:

備注:   X=試樣中還原糖的含量(以某種還原糖計(jì))( g/100g );

m1=斐林試劑( A、B液各半)相當(dāng)于某種還原糖的質(zhì)量(mg) ;

m2=標(biāo)定時(shí)體積與加入樣品后消耗的還原糖標(biāo)準(zhǔn)溶液體積之差相當(dāng)于某種

還原糖的質(zhì)量(mg) ;

m=試樣質(zhì)量(g) ;

F=樣品系數(shù)，含淀粉食品為0.8，其他為1 ;

V=測(cè)定時(shí)平均消耗試樣溶液體積( mI);

10=樣液體積( ml);

250=定容體積( ml );

1000=.單位換算系數(shù)。

還原糖含量≥10g/100g時(shí)，計(jì)算結(jié)果保留三位有效數(shù)字;還原糖含量< 10g/100g時(shí)，

計(jì)算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。

附錄:還原糖的定性試驗(yàn)

1、配制斐林試劑工作液:臨用前,取適量試劑(A)、試劑(B)等 量混合即成,即配即用。

2、向潔凈試管中加入1~ 2ml待測(cè)樣品。

3、向該試管中加入1ml斐林試劑工作液，充分搖勻。

4、將上述混合液置于沸水浴中,并持續(xù)1 ~ 3min.

5、觀察試管內(nèi)混合液顏色是否發(fā)生變化,其顏色變化順序應(yīng)為淺藍(lán)色-棕色-磚紅色(沉淀)。