四硫磺酸鹽煌綠增菌液基礎(TTB) 簡介說明
2022-07-27 14:04 作者:洛辰 來源:上海遠慕生物試劑
四硫磺酸鹽煌綠增菌液基礎(TTB)用于沙門氏菌選擇性增菌培養,需加入煌綠和碘液。
原理:蛋白胨和牛肉膏粉提供碳源、氮源和維生素滿足細菌生長的需求;氯化鈉可維持均衡的滲透壓;碳酸鈣能中和細菌產酸及吸收有毒的代謝產物;硫代硫酸鈉和四硫磺酸鈉結合可抑制腸道共生菌(四硫磺酸鈉是在培養基加入碘和碘化鉀時形成),而具有四硫磺酸鈉還原酶的細菌能在此培養基中繁殖;膽鹽和煌綠可抑制大腸群菌和其它革蘭氏陽性細菌。
使用方法:
1、稱取本品93.6g,加入蒸餾水或去離子水1 L,攪拌加熱煮沸至完全溶解,分裝于三角瓶中,每瓶100mL。
2、將三角瓶放入滅菌鍋中,121℃高壓滅菌20min,冷至30℃,每100mL基礎培養基中加入四硫磺酸鈉煌綠增菌液配套試劑(SR0040)2支配成四硫磺酸鈉煌綠增菌液或再添加2支新生霉素(SR0030)配成MKTTn肉湯,混合均勻。
3、在無菌環境中,移取增菌液1mL轉種于10ml TTB/MKTTn中或移取前增菌液25ml轉種于225ml TTB中。
4、將已接種的試管放入恒溫培養箱中,42℃培養18—24h。
5、觀察結果。
應用:用于牦牛沙門氏菌分離鑒定方法及流行病學研究
牦牛是青藏高原特有的物種,是當地牧民重要的生產和生活資料。牦牛沙門氏菌病在牧區長期流行,引起牦牛嚴重的下痢和死亡。目前國內外其他動物源沙門氏菌研究報道較多,但是對牦牛沙門氏菌報道較少。由于糞便是沙門氏菌主要來源,為了從源頭控制沙門氏菌的傳播,對體表健康牦牛糞便沙門氏菌監測是具有重要公共衛生學意義。
對體表健康牦牛糞便沙門氏菌的分離鑒定方法及牦牛源沙門氏菌的流行病學進行了研究。
實驗結果:根據ISO6579:2002(Annex D)標準、GB4789.42010標準、NMKL71標準和DIN EN12824:1998標準,在2010年采集26份牦牛糞便,選擇了三種選擇性增菌液TTB,SC,MSRV和三種選擇性培養基XLD,SS,CAS,比較了9種分離方法對牦牛糞便沙門氏菌分離的影響。
結果發現九種分離方法結果有差異,以TTB增菌液組合SS培養基分離率最高,為8/26。實驗總共檢測到13頭牦牛攜帶沙門氏菌,通過比較發現TTB增菌液和MSRV增菌液組合CAS培養基和SS培養基,分離率最高為12/26。
根據國內外文獻報道,比較了分別以invA、invE、stn、16S、bidui基因為檢測靶點的5種PCR方法。48株牦牛沙門氏菌的鑒定情況,證明了這5種PCR方法檢出率均為100%,因此這5種方法可用于牦牛源沙門氏菌快速檢測。參照Liu B等人建立的沙門氏菌血清群PCR快速檢測方法,48株牦牛沙門氏菌中共鑒定出9株血清B群、1株C1群和37株D群,證明該方法適用于牦牛沙門氏菌血清群PCR快速檢測。