微生物實驗室如果從事致病菌檢測、培養基質控驗收、方法驗證等相關工作，就應該備有質控菌株。實驗室需對使用的質控菌株進行規范性管理，以便有效地、安全地使用，保證實驗結果的準確性，今天遠慕生物為大家總結了實驗室質控菌株復蘇保存過程中常見的問題。 1. 菌株保存的是第三代，-80℃保存，再取出來活化的話屬于第幾代？

答：保存的是第三代復活出來后，如果采用平板或肉湯活化相當于轉接了一代，就是第四代了，如果還在瓷珠里的話就還是原來的代數。如果是保存在斜面上，這一支斜面一直就是第三代，如果轉接到另一支斜面就是第四代了。傳代原則，菌株活化復蘇不論以任何形式繁殖了一次就算是傳了一代。但如果僅是物理位置的轉移沒有繁殖就不是傳代，需要注意。

2. 菌株傳代保存到瓷珠里一定要挑單菌落嗎？

答：不一定非挑單菌落，但是一定要挑相同特征的菌落，就是說從同一個菌落純化出來的，以保證它們的特性完全一致。原則是盡量多挑，寧多勿少。

3. 菌株冷凍保存是-70℃還是-80℃有具體標準規定么？

答：其實是有標準的，《SN/T 2632-2010 微生物菌株常規保藏技術規程》是關于菌株保藏的一個標準，大家可以學習一下，各個保存方式都有介紹，但是瓷珠是比較新興的保存方式暫時里面還沒有收錄。

4. 怎樣延長質控菌株的保存時間呢？

答：大量的實驗證明質控菌株在低溫、干燥、缺氧、缺營養的條件下保存效果是最好的，越接近這種保存條件，菌株的保存時間越長。

5. 怎樣純化質控菌株？

答：純化就是從TSA上或別的非選擇性平板上轉挑取單菌落劃線再分離出單菌落，這就相當于純化了。

6. 我們只保存第一代菌株是不是要重新傳代保存呢，認證老師會不會認為這是個錯誤？

答：應該不會，認證老師不會提出這種問題的，不過最好是第一代菌株保存一些、第二代菌株保存一些，使用時工作菌株最好使用第三代菌株，第一代菌株可作為長期保存用。

7. 為何要將第三代作為工作菌株？

答：多傳代幾次后菌株的活力會明顯提高，但最多傳代到第五代后就不能用了，因為第五代后菌株雖然不會完全變異，但變異率會明顯增加，因此選用第三代作為工作菌株是比較合適的，若使用第一、第二代菌株活力沒有那么強。

8. 質控菌株是不是傳代超過五代就必須銷毀處理？

答：不一定。傳代超過五代只是存在菌種變異可能，但如果傳代到第六代、第七代……，經過形態、生化特性、DNA特征等驗證，性狀保持穩定，那么這些五代后的菌還是可以正常使用。

9. 菌種編號意義？

答：以金黃se葡萄球菌CMCC（B）26003為例CMCC為中國醫學菌種保藏中心縮寫，其它常見菌種保藏中心還包括ATCC（美國標準菌種收藏所）、CICC（工業微生物菌種保藏中心）、FSCC（食品安全菌種保藏中心）；B的意思是細菌，對應還有F（真菌）；26003為CMCC的保藏編號。

10. 同樣是金黃se葡萄球菌，ATCC6538與ATCC25923有什么不同？

表明其來源不同，生化特性有也有所不同。比如ATCC6538溶血能力較ATCC25923要強。

11. 使用磁珠保藏管保存質控菌株，加入菌液搖勻后為什么要吸干菌液？

防止剩余菌液冷凍后形成冰晶損傷保存的菌株。

12. TSA斜面一般多少度保存，可以放在冷藏里嗎？

2-8℃保存，放在冷藏是可以的；注意弧菌和綠膿桿菌要放到室溫20-25℃保存，否則會很快死亡。

13. 復蘇凍干質控菌株是否可以采用液體培養基？

答：可以，但建議使用平板培養基復蘇凍干菌株。有助于分辨復蘇出來菌株是否有污染，同時可初步觀察菌落形態以鑒定菌株純度。使用液體復蘇的話只能觀察到培養基混濁，無法確定是否有污染。

14. 復蘇凍干質控菌株是否可以采用顯色培養基？

答：不建議采用顯色培養基復蘇凍干菌株。凍干菌株復蘇需要一個最適生長環境，復蘇培養基不能選用選擇性培養基或顯色培養基，這些培養基里面含有抑菌成分不利于菌株復蘇。

15. 產氣莢膜梭菌做凍存時是否需要保持厭氧狀態？

答：不需要，產氣莢膜梭菌雖屬厭氧性細菌，但對厭氧程度要求并不太嚴格，按照一般菌株凍存方法進行凍存即可。