葡聚糖凝膠LH-60使用說明書

葡聚糖凝膠LH系列是將葡聚糖凝膠羥丙基化，并且專門適合用于有機溶劑分離嗜脂性分子，天然產物在有機溶劑中的純化，例如類固醇，萜類化合物，脂質和低分子量肽。
流動相的常用溶劑為：水、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷。
上述溶劑的極性依次降低，對帶有極性的被分離物而言，保留值和分離度依次遞增；同理選用的凝膠柱高可依次降低，流速可以增大（或上樣量可以增加，樹脂體積在低極性溶劑中明顯收縮）。
溶劑的溶解性，極性，沸點，毒性都是要考慮到的，二氯甲烷通常對被分離物質間的極性和堿性差異比較小時采用。甲醇通常對帶環狀(包括苯環)物質分離采用，葡聚糖凝膠LH-20對環狀物質有強烈吸附，同時具備親水和親脂雙重性質，且被分離物質的極性在分離過程中起著重要作用。

1 填料的準備
（1）葡聚糖凝膠LH-60以干粉形式存在，使用前必須溶脹，在膨脹期間應避免過度攪拌，不要使用磁力攪拌器，溶脹的程度將取決于所使用的溶劑體系，在室溫條件下至少溶脹24個小時。
（2）將溶脹好的填料，所有的緩沖液等材料平衡至實驗操作溫度。

2 裝柱
（1）檢查層析柱所有部件，特別是過濾網，密封圈，螺旋塞是否緊密，玻璃管是否干凈和完整。
（2）將柱內及柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液位，務必使底端無氣泡。
（3）用玻璃棒引導勻漿沿著柱內壁一次性倒入柱內，注意勿使產生氣泡。打開柱子出液口，使凝膠在柱內自由沉降，連結好柱子頂端柱頭。
（4）打開蠕動泵，讓緩沖液用使用時流速的1.33倍的流速流過，使柱床穩定（注意壓力不要超過填料最大耐壓）。
注意：上述裝柱方法可用于葡聚糖凝膠LH-20在大多數溶劑中的填充。在一些溶劑中，例如氯仿，葡聚糖凝膠LH-60比溶劑密度小，并在其中漂浮，則需用其他方法。

3 平衡
上樣前平衡層析柱至少5-10個柱體積直到記錄儀基線變得平穩為止。

4 上樣
樣品一定要離心或過濾后（0.45um濾膜）上樣。
樣品體積應在總柱床體積的1-2％的范圍內，視分離情況可以調整，柱高的選擇也與分離要求相關，柱長越高，分離效果相應越好，但是，柱高過高的凝膠層會引起較大的反壓，應當盡可能避免。難分離物質要有一定柱高和流速控制。

5 洗脫
一般來說，流速越低，分辨率越好。

6 再生
通常通過用5-10倍柱體積的洗脫液洗滌柱，如果改變條件，需要用新的洗脫液重新進行平衡操作。

7 保存
未使用的填料，室溫密閉保存。使用完的填料，用純水將鹽分徹底沖洗，最后保存在20%乙醇中，4℃保存。

8 注意事項：
（1）上樣之前，樣品必須經過膜過濾及去除色素，否則雜質及色素會被吸附到填料上，影響填料的正常使用。所有的緩沖液均需要用0.45um的過濾器過濾。
（2）在使用過程中，避免使用高濃度的強酸強堿，酸和堿的濃度應低于0.1摩爾。堿會使流速變慢。
（3）不同的樣品，吸附和洗脫方法不相同，可以根據相關的文獻進行。