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人胸腺活化調節趨化因子(TARC/CCL17)ELISA試劑盒操作步驟

2023-12-29 11:37 作者:洛辰 來源:上海遠慕生物試劑
產品名稱:人胸腺活化調節趨化因子(TARC/CCL17)ELISA試劑盒
反應類型:雙抗夾心法
規格:96T/48T
反應時間:1.5 h
檢測方法:酶聯免疫吸附測定
檢測范圍:25 pg/mL – 800 pg/mL
靈敏度:1.0 pg/mL
上樣體積:50 μL/孔
樣本類型:血清、血漿、組織、細胞上清或其他生物樣本
用途:該試劑盒采用“一步”夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)體外定量檢測血清、血漿、組織、細胞或其他相關生物液體中 TARC;CCL17 濃度。

檢測原理

將目標抗體包被于96孔微孔板中,制成固相載體,向微孔中分別加入標準品或標本,其中的目標連接于固相載體上的抗體結合,然后加入辣根過氧化物酶標記的抗體,將未結合的抗體洗凈后再次徹底洗滌后加入TMB底物顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的目標呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(O.D.值),計算樣品濃度。

特異性
可檢測樣本中的 TARC;CCL17, 且與其它類似物無明顯交叉反應。

重復性
板內,板間變異系數均<10%。
 
批內差
取同批次試劑盒對低、中、高值定值樣本進行定量檢測,每份樣本連續測定20次,分別計算不同濃度樣本的平均值及SD值。

批間差
選取3個不同批次的試劑盒分別對低、中、高值定值樣本定量測定,每個樣本使用同一試劑盒重復測定8次,分別計算不同濃度樣本的平均值及SD值

精密度
精密度用樣品測定值的變異系數CV表示。CV(%)=SD/mean×100  CV<10% Inter-批間差: CV<13%

穩定性
經測定,試劑盒在有效期內按推薦溫度保存,其活性降低率小于5%。
為減小外部因素對試劑盒破壞前后檢測值的影響,實驗室的環境條件需盡量保持一致,尤其是實驗室內溫度、濕度及溫育條件。其次由同一實驗員來進行操作可減少人為誤差。

試劑盒的組成
未開封試劑盒,4℃保存;已開封,標準品-20℃保存,酶標板加干燥劑后密封-20℃保存,其他4℃保存。
英文名稱:中文名稱:規格:規格
Microe isa stripplate:包被微孔板:96T:48T
Standard:標準品:0.3ml/管*6:0.3ml/管*6
HRP-Corjugate:HRP標記抗體:10mL:5mL
Sample Diluent:樣本稀釋液:6mL:3mL
Chromogen SolutionA:底物液A:6mL:3mL
Chromogen SolutionB:底物液B:6mL:3mL
Stop Solution:終止液  :6mL:3mL
20× Wash Solution:20×濃縮洗滌液:25mL:15mL
Product Description:說明書:1份:1份
Sealing film:封板膜:2張:2張

實驗所需自備物品
1、450±10nm濾光片酶標儀(建議儀器使用前預熱)  
2、高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL.   
3、Eppendorf 移液器.   
4、蒸餾水或去離子水.   
5、脫脂棉吸水紙.   
6、37℃恒溫箱.  
7、100ml和1000ml量筒
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