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如何養出一盤飽滿漂亮的細胞

2019-09-23 12:02 作者:洛辰 來源:上海遠慕生物試劑

     臨近開學,我司技術支持(兼心理輔導師)經常收到這樣焦慮的問題:“ 老si,你好,如何才能收獲一盤漂亮的細胞呢?為啥別人家的細胞養得那么好呢,我的就一言難盡呢”養出漂亮細胞 這個事兒本就說來話長~之前講過細胞貼壁、老化、成團、凍存、復蘇、污染等問題 。這次小編又整理了一遍,先看看這些基本點是否都做好了

 

絕對的無菌意識
1. 細胞剛拿到手最好先做一下支原體檢測,發現有污染迅速處理掉。
2. 嚴格無菌操作,BI也提供Pharmacidal噴壺,有效預防真菌(和孢子),細菌(和孢子),支原體和病毒 (包括HIV和Hepatitis B) 的生長和污染。
3. 真的不要和別人共用試劑耗材,自己準備一套!
4. 水浴鍋很臟,可用BI Aquaguard-1 消毒水盤,效果非常好。
5. 最好是同一時間只有一個人在細胞房養細胞。

用好培養基和血清
1. 養細胞之前,就要先了解細胞的來源、種類、名稱,查閱一定量的文獻,確定所需培養基種類及是否需要添加特殊成分。
2. 血清主要功能是補充細胞生長因子,提供細胞生長所需的蛋白質、脂肪、糖類、不同細胞對生長因子的要求也不一樣。血清替代物取代血清補充生長因子和蛋白質,但不一定是最適合細胞的,因此使用時要注意,避免引起細胞分化或老化。
3. 這里我們順便說一下常見的血清沉淀:血清沉淀是血清纖維的凝集,不影響細胞生長,不必驚慌!我們建議2000rpm離心5min取上清即可,并不影響血清質量。
4. 如果細胞活力差,可增加血清濃度到20%, 給細胞較多的生長因子,等細胞長起來再降回原來的濃度。
 

了解細胞生長習性 
不同的細胞生長習性不同,了解細胞生長習性,正確計數,才能掌握好傳代密度。對于一般細胞株,控制在三天一傳,是比較合適的,細胞不會太擠也不會太寂寞。但例如癌細胞,一發起瘋來半天就可以傳代,不及時換液或擴增分分鐘會餓死或擠死。
所以剛開始接觸一款細胞,要勤觀察,及時掌握它的生長情況。掌握細胞的生長節奏之后可以變成一天一看或兩天三看,畢竟太頻繁的把它從培養箱里拿出來也不太好。
 

胰酶消化程度是要害
消化一定程度上是對細胞的一種折磨,在使用胰酶(Trypsins)細胞消化液的過程中要特別注意避免消化液被細菌污染。胰酶細胞消化液消化細胞時間不宜過長,否則細胞鋪板后生長狀況會較差,做流式時的CD Marker 也可能會下降。

對大部分細胞消化來說,可以在消化到差不多快要脫落的時候,移除大部分胰酶,然后直接加新鮮的培養基將細胞吹打下來,省去離心步驟。殘余的胰酶含量很低,所以不會對細胞產生任何影響。
對于難消化的細胞,如HCT15, LS411和KM12,用不含Ca2+、Mg2+的PBS洗滌一次后,加入稍微多一點胰酶,置37oC徹底消化(一般為幾分鐘)至脫落(一晃細胞就掉下來),然后再加含血清的培養基終止胰酶反應、離心 (若是無血清培養基,需改加胰酶抑制劑)。這么做的道理是,細胞消化不徹底,勢必會增加吹打輔助脫落的次數,而吹打次數越多,細胞活性越差。
 

培養瓶的選擇
一般,生長速度慢的細胞如果想要更漂亮的細胞狀態,那么采用塑料瓶會比玻璃瓶的效果好;生長速度快的細胞,用玻璃瓶培養的效果會更好。因此,對于同一種細胞,在其生長速度慢的時候(比如細胞剛復蘇時或者原代培養),塑料瓶會好一點;而在其生長旺盛的時候,玻璃瓶則相對會好一點。
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