Q1: 熒光素的純度對實驗有成影響嗎？

A：有影響。99%以上的純度較好。

Q2: 甲蟲熒光素和螢火蟲熒光素之間有區別嗎？

A：二者之間沒有區別。

Q3: 如何溶解熒光素，其溶液穩定嗎？

A：熒光素鉀鹽在水中的溶解度為60 mg/ml，熒光素鈉鹽溶解度為100 mg/ml。熒光素游離酸是不溶于水的，但是在甲醇中的溶解度為10 mg/ml，在DMSO中溶解度為50 mg/ml。

熒光素鈉鹽和鉀鹽的水溶液短期內存放于-80℃，對實驗效果沒有明顯影響。有實驗證明，將熒光素溶解于脫氧中的水中會更穩定些。

對于一些較為敏感的試驗，為了控制試驗中的可變因素，較推薦新鮮配置的反應液 。例如，低濃度的熒光素酶或者并非最適的反應條件是需要高質量的底物才能進行反應 。

Q4: 熒光素鈉鹽和熒光素鉀鹽有什么區別？

A：目前的研究沒有發現二者在使用效果上的區別，僅在物理特征上有些小的差別，如熒光素鈉鹽溶解度會高于熒光素鉀鹽。但是在體內實驗研究中，有更多的研究者傾向于選擇熒光素鉀鹽，據不完全統計，選用鉀鹽的使用人是鈉鹽使用人的3倍。

Q5: 熒光素鈉鹽，熒光素鉀鹽，和熒光素游離酸之間有什么區別？

A：游離酸不溶于水，在甲醇中的溶解度為10 mg/ml，在DMSO中溶解度為50 mg/ml，同樣可用NaOH，KOH弱堿去調節溶液的PH值。熒光素的鈉鹽或者鉀鹽在使用過程中會更方便，尤其是在體內成像實驗中，因其能夠溶解在水中，反應毒性也會更小些。

Q6: 為什么溶解熒光素鈉鹽或者鉀鹽的時候需用不含Ca²⁺或?Mg²⁺離子的PBS，有無別的鹽溶液可用來溶解熒光素？

A：PBS，或者其他的磷酸鹽緩沖液，或DPBS，常用來進行生物學研究或者細胞相關研究。PBS/DPBS為等滲溶液，PH為7.2-7.6之間。DPBS和PBS之間無差別，只是通常情況下，DPBS是不含鈣鎂離子。鈣鎂離子可能會抑制某些蛋白酶的活性。此外Mg²⁺是催化熒光氧化的重要因素，Ca²⁺是和腔腸素氧化有關的離子。其他的鹽溶液也可用來溶解熒光素，但要避免溶液中的陽離對實驗造成影響。

Q7: 熒光素酶的發光特性？

A：熒光素腹腔注射老鼠后約1 min后，能夠表達熒光素酶的細胞開始發光，10 min后強度達到穩定的最高點，在最高點持續約20-30 min后開始衰減，約3 h后熒光素排除，發光全部消失，最好的檢測時間是在注射后15-35 min內。其動力學曲線如下圖：

Q8: 怎么將熒光素注入小鼠體內，注射方法之間的區別是什么？

A：熒光素可通過腹腔注射或尾部靜脈注射注入小鼠體內。約1 min可擴散到小鼠全身。大部分情況下使用熒光素濃度為150 mg/kg。對于20 g的小鼠約使用3 mg的熒光素即可。對于腹腔注射來講，擴散較慢，開始發光較慢，持續發光時間較長。對于熒光素的尾部靜脈注射，擴散快，開始發光快，但發光持續時間較短。

Q9: 熒光素底物可以透過血腦屏障嗎？

A：熒光素底物約280道爾頓，熒光素的水溶性和脂溶性都非常好，很容易穿透細胞膜和血腦屏障。

Q10: 熒光素酶的表達穩定性如何？

A：通過穩定篩選等過程，熒光素酶基因是能夠插到細胞染色體內的。當細胞進行分裂、轉移、分化時，熒光素酶也得到持續穩定的表達，熒光素酶的半衰期約為3 h，故只有活細胞才能持續表達熒光素酶。