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遠慕選購指南:如何選擇PCR實驗的耗材?

2020-07-01 10:52 作者:洛辰 來源:上海遠慕生物試劑


關于其基因組的測序和信息分析,早在兩年前就由華大基因、浙江大學和中國科學院的科學家團隊共同合作完成。后續功能的驗證主要包括PCR檢測、ChIP、IP、IHC、IF、FISH等手段。而其中就簡單的方式就是PCR驗證,那關于PCR實驗有哪些影響因素呢?

我們一般想到的可能是獲取的DNA/RNA質量、反轉錄的效率、引物的特異性乃至DNA聚合酶的保真度、擴增長度等問題,但很少有人會想到耗材的選擇,可能也會影響您的實驗結果。那么關于PCR實驗耗材我們改如何選擇呢?

首先需要明確的是我們做的是哪種PCR實驗。根據檢測方法的不同,PCR實驗分為普通PCR法和熒光定量PCR法,前者一般是終點PCR跑膠法測定,所以在選擇耗材時需要關注的主要是耗材本身的導熱性和密封性;而后者是實時檢測熒光信號,除了導熱性和密封性外,對透光性和避光性也有所要求。換句話而言,可以做熒光定量PCR的耗材一定可以來做普通PCR,反之,效果卻會差很多!
 

確定好了實驗類型,我們就可以選擇耗材了,如前面所述,我們知道了密封性、導熱性、透光性、避光性等因素是我們需要關注的,那為什么要關注這些呢?

一、密封性

密封性越好,產物的揮發越少,得到的產物就越多同時氣溶膠的產生也越少,對于下一輪實驗的污染也就越少,也就意味著假陽性的產生率越低。

二、導熱性

導熱性越好越均一,PCR的速度就越快,準確度也越高。

三、透光性

這主要是對于熒光定量而言,我們知道它是一種實時定量的方式,那么耗材本身的透光性就直接關系到我們檢測到的熒光信號多少,如果選擇耗材透光性不足,本該檢測到的信號檢測不到,那就會造成我們對結果的誤判。

四、避光性

這也是針對熒光定量而言的,同上面的因素,如果我們在整個實驗過程中沒注意避光,帶有熒光的試劑過度被消耗,那*直接就會影響我們實驗的擴增效率,導致不準確的結果產生。

PCR單管

采用獨特的一次注塑成型技術,超薄設計,熱傳導快,視窗比平面低,不易被劃擦,管子密封性更好,近乎零蒸發,減少了氣溶膠的污染,*大程度避免了假陽性的產生。熒光系列,蓋子高度透光,可適用于頂讀與低讀。

八聯管(適用普通PCR)

低于平面的高透視窗設計,可以*大程度避免被劃擦。100%進口的原材料的使用使得管壁具有均一的平整和穩定的不黏壁性,確保了樣品處理和吸取時的精準度。

PCR板

不同于市面上其他廠家底部注塑的方式,遠慕注塑點是在板面上的孔與孔的交叉處,這樣使得PCR板的管底與PCR儀的接觸更好,同時采用純度高達99.9%的聚丙烯,超薄設計、壁厚一致均勻的工藝使得熱傳導精確、控溫準確、有效減少了實驗循環時間。
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