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中性粒細胞堿性磷酸酶染色液(NAP)說明書

2021-09-16 13:58 作者:洛辰 來源:上海遠慕生物試劑
產品名稱:中性粒細胞堿性磷酸酶染色液(NAP)
產品規格:3×10ml
產品用途:專門用于血液或骨髓細胞涂片的中性粒細胞的堿性磷酸酶染色,又稱同時偶聯法。
注意事項:堿性磷酸酶活性部位呈藍色,位于胞槳中。油鏡下計數101個中性粒細胞,求出百分比和積分。非特異性反應少,結果可靠。
儲存條件:4℃,避光,6個月

簡介:堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase,簡稱ALP或AKP)為一類磷酸酯酶,廣泛分布于哺乳動物組織內,其活性所需最適pH 9.2~9.8。中性粒細胞堿性磷酸酶染色液(NAP)不是采用金屬沉淀法來顯示堿性磷酸酶活性,而是采用偶氮偶聯法(又稱同時偶聯法),其原理是在pH9.2~9.8的堿性條件下,細胞內堿性磷酸酶可使AB-BI磷酸鹽水解,釋放出磷酸與萘酚,后者與偶聯重氮鹽生成有色產物,定位于細胞質中。該染液專門用于血液或骨髓細胞涂片的中性粒細胞的堿性磷酸酶染色,堿性磷酸酶活性部位呈藍色,位于胞槳,結果較金屬鹽沉淀法可靠。

操作步驟(僅供參考):
(一)、涂片
1、制備新鮮血液或骨髓細胞涂片,NAP固定液固定,充分水洗。
2、滴加配制好的NAP孵育液孵育,水洗。
3、滴加核固紅染色液或甲基綠染色液復染。水洗、晾干、鏡檢。
(二) 貼壁培養細胞
1、取6孔板或其他容器培養的細胞,棄液,PBS清洗干凈。
2、加入NAP固定液固定30~60s或4%多聚甲醛固定,PBS清洗。
3、滴加配制好的NAP孵育液,放入濕盒中,避光孵育,PBS清洗。
4、入核固紅染色液或甲基綠染色液復染。PBS清洗、鏡檢。

臨床意義:
1、類白血病反應積分明顯增高,未經治療的慢性粒細胞白血病積分明顯減低。
2、急性細菌性感染積分明顯增高,病毒性感染積分多正常或減低。
3、再生障礙性貧血積分常增高,PNH、MDS積分常減低。

注意事項:
1、血液或骨髓細胞涂片應新鮮,薄厚適宜,及時固定,否則會影響酶的活性。
2、培養細胞染色操作過程中,清洗、染色等步驟都應輕微,以免損傷或丟失細胞。
3、NAP孵育液易失效或降低陽性強度,即配即用,不宜久置。
4、復染時,核固紅染色液或甲基綠染色液二者取其一。
5、每次染色時,應有陽性對照片。
6、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作
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