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油紅O異丙醇飽和液使用方法

2021-09-15 15:20 作者:洛辰 來源:上海遠慕生物試劑
產品名稱: 油紅O異丙醇飽和液
規格:100ml
用途:脂肪/脂滴染色
注意事項:主要由油紅O、異丙醇組成,染色后脂滴呈橘紅色。
儲存條件:室溫,24個月

簡介:脂質(Lipid)是中性脂肪、類脂及其衍生物的總稱,其共同的物理特性是不溶于水,易溶于有機溶劑(如乙醇、乙醚等)。人體的脂肪主要有兩種:1、儲存脂肪,如中性脂肪,主要分布于皮下、腎、胰腺等部位。2、結構脂肪,如類脂(磷脂、糖脂、膽固醇等),主要分布于細胞內。中性脂肪(Neutralfat)是由三分子脂肪酸和一分子甘油組成的脂類,呈中性。中性脂肪是儲存能量的方式之一,在氧化時釋放出能量。在正常情況下,除脂肪細胞外,其他細胞在光學顯微鏡下幾乎看不到脂滴,如果細胞質內出現大量脂滴即為脂肪變性,常見于肝細胞、心肌細胞、腎曲管上皮細胞等。中性脂肪染色經常采用蘇丹Ⅱ、蘇丹Ⅲ、蘇丹Ⅳ、蘇丹黑B、油紅O法等。傳統方法采用蘇丹染料,最近發現偶氮染料油紅O更適合脂肪的染色。油紅O是很強的脂溶劑和染脂劑,較易與甘油三脂結合呈小脂滴狀,與磷脂結合力稍差。其染色原理一般認為是物理上的溶液作用或吸附作用,借溶液作用使脂肪染色。染料在冰凍切片內脂質的溶解度較原溶劑中的溶解度更大,所以在染色時染料就從有機溶劑轉移入脂質而使脂肪染色。

油紅O染色主要用于顯示組織器官的脂肪變性和類脂質的異常沉著,常發生于肝、腎、心等實質臟器的脂肪變性,細胞內出現多數中性脂肪滴;鑒別和診斷脂肪組織中所發生的腫瘤及其性質。標本不采用含有乙醇的固定液(如需要固定可采用10%福爾馬林)、也不采用石蠟切片,需用冰凍切片或碳蠟切片。脂肪的陽性染色結果呈橘黃至紅色,但具體顏色因脂質濃度而定。

自備材料:
1、60%異丙醇
2、蒸餾水
3、Mayer蘇木素染色液
4、1%鹽酸溶液
5、甘油明膠或阿拉伯糖膠

操作步驟(僅供參考):
1、油紅O異丙醇飽和溶液:蒸餾水按一定比例配制油紅O染色工作液。
2、冰凍切片,不固定或福爾馬林固定后水洗。
3、切片入蒸餾水中稍沖洗。
4、切片入異丙醇浸洗。
5、切片入油紅O染色工作液(加蓋),密閉染色。
6、分色:入60%異丙醇內稍洗以便去除染液。
7、入蒸餾水中稍微清洗。
8、入Mayer蘇木素染色液,復染核。
9、(可選)1%鹽酸溶液稍微分化一下。
10、(可選)自來水漂洗10min或稀碳酸鋰溶液促藍。
11、入蒸餾水稍微清洗。
12、用濾紙吸干周圍水分。
13、甘油明膠或阿拉伯糖膠封固。

注意事項:
1、油紅O染色工作液不夠穩定,易產生沉淀,不宜提前配制。
2、如果60%異丙醇不易獲得,亦可采用70%乙醇。
3、由于脂肪易溶于有機溶劑,顯示脂肪一般不能像石蠟切片一樣處理,而通過冰凍切片染色來顯示。
4、作為脂肪染色的冰凍切片不可太薄,過薄的切片常會使脂質丟失。
5、Mayer蘇木素染色液復染時間不能過長。
6、染色結果不能長期保存,應盡快觀察及照相。
7、甘油明膠封固的樣本,保存時間不長。如需長期保存,可以在蓋玻片與載玻片交界的邊緣用中性樹膠封閉。
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